上海龙华医院 李和根 上海医药工业研究院(200437) 陈秀华 任文龙 姚玉龙
摘 要 金复康口服液是治疗肺癌的中药验方，根据中医“异病同治”的原则，对金复康口服液进行了实验性肝癌的治疗作用和对小鼠免疫功能影响的研究。实验结果表明,金复康口服液在体外对肝癌细胞,在体内对及人体移植性肝癌有一定的抵制作用.
关键词 金复康口服液 肝癌细胞株 移植性肝癌 NK细胞 淋巴细胞 IL-2
金复康口服液是根据上海中医药大学附属龙华医院刘嘉湘教授的处方研制的治疗肺癌的中药验方［1］.我们根据中医“异病同治”的原则，研究了金复康口服液对实验性肝癌的活性，显示了一定的治疗作用.
1 实验材料
1.1 动物：昆明种小鼠，由上海医药工业研究院动物房提供，♀，体重 19～21 g。BALB/C 裸鼠，由上海肿瘤研究所提供，体重 17～18 g。C57BL/6 小鼠，由BK公司提供，♀，体重 18～20 g。
1.2 药物：金复康口服液，江西上饶制药厂提供，批号为961112，含量为 3 g 生药/mL。环磷酰胺(CTX)，华联制药公司生产，批号940106。香菇多糖，福州梅峰制药厂生产，批号911026，每毫升含香菇多糖 2 mg。
1.3 细胞株及动物移植性肿瘤：YAC-1 细胞，小鼠肝癌 HAC，人体肝癌 QGY。
1.4 其它材料：培养基：RPMI 1640 内含 15%NBS、巯基乙醇等。3H-TdR：上海原子核研究所，放射性浓度 37 MBq/mL。ConA(刀豆球蛋白)：Sigma 产品，配成 50 mg/mL。
2 方法与结果
2.1 金复康口服液抗肿瘤作用
2.1.1 对小鼠肝癌 HAC 的作用：取生长良好的昆明种小鼠肝癌HAC腹水，用生理盐水1∶4 稀释后，每只小鼠腋皮下接种0.2mL,随机分组，设生理盐水对照组和CTX阳性对照组〔100mg/kg,ip×3〕，金复康口服液设 3 个剂量组，分别为 75，37.5 和 18.75 g 生药/kg体重，ig×7，给药体积为 0.5 毫升/只。次日起给药，连续口服灌胃七天。接种后十日脱颈处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组瘤重之大小。结果判定根据以下公式：
试验结果表明，金复康口服液对小鼠肝癌 HAC 有一定的抑制作用，高剂量 75 g/kg 时抑瘤率达 54.13%，且有明显的量效关系，试验结果见表1。
表1 金复康口服液对小鼠肝癌 HAC 的作用
| 组 别 |
剂 量
(g/kg) |
给药方案 |
动物数
始 终 |
瘤重(g)
(x±s) |
抑瘤率
(%) |
金复康 |
75.00 |
po x 7 |
10 |
10 |
1.11±0.44** |
54.13 |
金复康 |
37.50 |
po x 7 |
10 |
10 |
1.50±0.56** |
38.02 |
金复康 |
18.75 |
po x 7 |
10 |
10 |
1.71±0.59** |
29.34 |
CTX |
0.10 |
ip x 3 |
10 |
10 |
0.52±0.09** |
78.51 |
空白对照 |
25ml/kg |
|
10 |
10 |
2.42±0.88 |
|
与生理盐水组比较：**P＜0.01
2.1.2 金复康口服液对接种于裸鼠的人体肝癌QGY的作用
取生长旺盛的裸鼠人体肝癌QGY瘤组织，用生理盐水匀浆制备成1∶4稀释的细胞悬液，每只BALB/C裸鼠右腋部皮下接种0.2 mL，接种后次日随机分组并开始给药，接种后30天解剖动物，取瘤称重，计算瘤重抑制率。
试验结果表明，金复康口服液对移植于裸鼠的人体肝癌QGY有一定的抑制作用，随着剂量增加，作用增强，高剂量75g/kg时抑瘤率达32.92%。结果见表2。
表2 金复康口服液对小鼠肝癌 QGY 的疗效
| 组 别 |
剂 量
(g/kg) |
给 药
方 案 |
动物数
始 终 |
动物体重(g)
始 终 |
瘤重(g)
(x±s) |
抑瘤率
(%) |
生理盐水 |
- |
ig×10 |
6 |
6 |
17.1 |
17.9 |
1.61±0.86 |
|
CTX |
0.10 |
ip×3 |
6 |
6 |
16.8 |
16.0 |
0.28±0.08** |
82.60 |
金复康 |
18.75 |
ig×10 |
6 |
6 |
17.0 |
17.1 |
1.35±0.22* |
16.15 |
|
37.50 |
ig×10 |
6 |
6 |
16.5 |
16.7 |
1.20±0.31** |
25.46 |
|
75.00 |
ig×10 |
6 |
6 |
16.7 |
16.8 |
1.08±0.53** |
32.92 |
与生理盐水组比较：*P＜0.05 **P＜0.012.2 金复康口服液对免疫功能的影响
2.2.1 对小鼠体内自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响：取 C57BL/6 小鼠，随机分为给药组、生理盐水对照组和香菇多糖阳性对照组(0.2 mL/20 g体重，即 20 mg/kg)，每日给药1次，共7次后处死动物。按文献方法［3］略有改进，以脾细胞作为效应细胞，YAC-1细胞为靶细胞， 以靶∶效之比为1∶100的细胞加入 96 孔细胞培养板内，加入3H-TdR 18.5 kBq/孔，37 ℃，5%CO2 条件下培养 24 h，多头细胞收集器收集细胞，液闪仪上测定 cpm 值，计算特性掺入抑制率(Pi)作为 NK 细胞的活性。
试验结果表明，金复康口服液连续给药 7 d 后能明显增强小鼠体内 NK 细胞的活性。与生理盐水组相比有显著性差异，以 10 g/kg 组最为明显，该组与香菇多糖组相比无显著性差异 (P＞0.05)，结果见表3。
表3 金复康口服液对小鼠体内自然杀伤细胞(N细胞)活性的影响
| 组 别 |
剂量
(g/kg) |
给药
方案 |
动物数 |
cpm值
(x±s) |
Pi
(%) |
生理盐水 |
- |
ig×7 |
10 |
4 002±426 |
|
香菇多糖 |
0.02 |
iv×7 |
10 |
1 367±235** |
65.8 |
金复康 |
5.0 |
ig×7 |
10 |
2 098±157** |
47.6 |
|
10.0 |
ig×7 |
10 |
1456±251** |
63.6 |
|
20.0 |
ig×7 |
10 |
1 988±315** |
50.3 |
与生理盐水组比较：**P＜0.012.2.2 对小鼠体内脾淋巴细胞增殖的影响：取 C57BL/6小鼠，随机分为给药组、 生理盐水对照组和香菇多糖阳性对照组，每日给药 1 次，共 7 次后处死动物，按文献方法［4］稍作改进，用 RPMI 1640 培养基调整脾细胞悬液细胞浓度为 1×107个/毫升，在 96 孔细胞培养板上每孔加细胞，ConA 及培养基，37 ℃，5% CO2 条件下培养 48 h 后加入 3H-TdR，18.5 kBq/孔，再培养 18 h，用多头细胞收集器收集细胞，液闪仪上测定cpm 值，以对照组与给药组的 cpm 值进行比较。
实验结果表明，金复康口服液连续给药 7 d 后能明显促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，与生理盐水组相比有显著性差异，以 10 g/kg 剂量组对小鼠体内脾淋巴细胞活性影响最大，该组与香菇多糖组相比无显著性差异 (P＞0.05)，实验结果见表4。
表4 金复康口服液对小鼠体内脾淋巴细胞增殖的影响
|
剂 量
(g/kg) |
给药
方案 |
动物数 |
cpm值
(x±s) |
生理盐水 |
- |
ig×7 |
10 |
2 930±131 |
香菇多糖 |
0.02 |
iv×7 |
10 |
6 516±187 |
金复康 |
5.0 |
ig×7 |
10 |
3 218±101* |
|
10.0 |
ig×7 |
10 |
6 307±176** |
|
20.0 |
ig×7 |
10 |
4 003±199** |
与生理盐水组比较：**P＜0.012.2.3 对小鼠体内 IL-2 的影响：取 C57BL/6 小鼠，随机分为给药组、对照组及香菇多糖阳性对照组，对照组给生理盐水，连续给药 7 d 后，制备脾细胞悬液，调整细胞浓度为 1×107/mL，24 孔板上每孔加 2 mL 细胞及 ConA 5 μg/mL，37 ℃，5% CO2 条件下培养 24 h 收集上清液，应用小鼠胸腺细胞增殖法测定 IL-2 活性，即无菌条件下取胸腺，制备细胞悬液，调整细胞浓度为 2×106个/毫升，ConA 3 μg/mL 及收集的上清液分别加在 96 孔细胞培养板上，37 ℃，5%CO2 条件下培养 48 h，培养结束前 6 h 加入3H-TdR 18.5 kBq/孔，细胞收集仪上收集细胞，液闪仪上测定 cpm 值，并以对照组及给药组比较之。
实验结果表明，金复康对 IL-2 的活性激活仅在 10 g 生药/kg 体重时才出现，其余二组均无明显影响，见表5。
表5 金复康口服液对小鼠产生 IL-2 的影响
| 组 别 |
剂 量
(g/kg) |
给药
途径 |
动物数 |
cpm值
(x±s) |
生理盐水 |
- |
ig×7 |
10 |
3 155±156 |
香菇多糖 |
0.02 |
iv×7 |
10 |
4 733±352** |
ConA |
|
|
|
250±178 |
金复康 |
5 |
ig×7 |
10 |
3 220±199 |
|
10 |
ig×7 |
10 |
4 760±252** |
|
20 |
ig×7 |
10 |
3 231±167 |
与生理盐水组比较：**P＜0.01
3 讨论
金复康口服液为治疗气阴二虚型肺癌患者的中医验方，本实验表明金复康口服液对人及小鼠的肝癌也有一定的抑瘤效果，验证了中医异病同治的原则，免疫学研究也表明金复康口服液有明显的促进免疫功能的作用。
中医治疗历来崇尚“治病必求其本”，更何况正气虚损不仅是肺癌发生的内在原因，也是其他各种癌症发生的内在原因，而且也是癌症发展的一种必然趋势。癌症到了晚期往往由于邪毒内蓄而化热，耗气伤阴，正气虚损尤为显著。金复康口服液组方中，生黄芪性甘，微温，有益气、固表、托毒生肌、利水消肿之功；女贞子和麦冬等入肝肾经，可补肾阳；石上柏和七叶一枝花等有清热解毒、消肿止痛、散瘀等功效。因而对人体肝癌及小鼠肝癌均有一定的作用，临床上根据中医异病同治原则而采用金复康口服液治疗肝癌也取得了一定的效果。
金复康口服液有明显的促进免疫功能的作用，但在 10 g 生药/kg 体重时作用最强。金复康口服液在较低和较高剂量时对免疫功能的作用不明显，试验结果提示，金复康口服液虽然无明显毒性，但掌握适当的剂量才能在临床上取得一定的疗效。
李和根 男，1988年毕业于上海中医学院，获学士学位。主治医师。主要从事肿瘤临床及实 验研究。参与多项国家“七·五”、“八·五”、“九·五”及市局级科研课题。曾获上海 市科技进步三等奖。
参考文献
1，刘嘉湘，施志明，徐振晔，等.亚洲医药，1996，(11)：32
2，Mosmann T.J Immunol Methods,1983，65：55
3，章崇杰，吴慧君.华西医大学学报，1987，18(2)：126
4，徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1991：1226
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